Кар. 1 ZÁKLADNÍ TYPY CHROMATOGKAFIE ...15 - O. Mikeš // 1.1 Úvod ...15 // 1.1.1 Význam separačních metod ...15 // 1.1.2 Stručná historie separačních metod ...16 // 1.2 Klasické dělení chromatografických metod podie podstaty separačního // procesu ...22 // 1.2.1 Adsorpční chromatografie ...24 // 1.2.2 Rozdělovací chromatografie ...24 // 1.2.3 Iontově výměnná chromatografie (chromatografie na měničích iontů) 25 // 1.2.4 Gelová chromatografie ...26 // 1.2.5 Afinitní chromatografie ...26 // 1.2.6 Jiné typy chromatografie ...28 // 1.3 Metodická klasifikace chromatografických metod podie pracovní // techniky ...28 // 1.3.1 Frontálni chromatografie ...28 // 1.3.2 Vytěsňovací chromatografie ...29 // 1.3.3 Eluční chromatografie ...30 // 1.3.4 Jiná metodická klasifikace ...32 // 1.4 Moderní klasifikace chromatografických metod podle fází, mezi nimiž dochází k separaci ...33 // 1.4.1 Kapalinová chromatografie ...34 // 1.4.2 Plynová chromatografie ...34 // 1.5 Jiné způsoby klasifikace chromatografických metod ...34 // Literatura ...36 // Kap. 2 TEORIE CHROMATOGRAFIE ...37 - J. Novák // Seznam použitých symbolů ...37 // 2.1 Úvod ...40 // 2.2 Obecný popis chromatografického děje ...41 // 2.2.1 Látková bilance chromatografované látky v chromátografickém systému 41 // 2.2.2 Model ideální lineární chromatografie ...45 // 2.2.3 Retenční rovnice ...45 // 2.3 Racionální popis modelu neideální lineární chromatografie ...46 // 2.3.1 Rozmývání chromatografické zóny ...46 // 2.3.2 Představa teoretického patra ...49 // 2.4 Tok mobilní fáze ...49 // 2.5 Sorpční rovnováha a distribuční konstanta ...50 // 2.6 Chromatografické rozlišení ...53 // Literatura ...54 // Кар. 3 PAPÍROVÁ CHROMATOGRAFIE ...55 . Ž. Procházka, M. Hejtmánek, K. Šebesta а V. Tomášek // Úvod (Ž. Procházka) ...55 //
Chromatografioké papíry ...56 // Zařízení pro papírovou chromatografii ...58 // Výběr rozpouštědel ...65 // Definice RF, RM, jejich měření a použití ...70 // Metodika práce (Ž. Procházka) ...78 // Příprava vzorku ...78 // Nanášení vzorku ...80 // Manipulace s chromatogramy a jejich vyvíjení ...80 // Sušení ...83 // Detekce ...84 // Eluce skvrn ...85 // Uchovávání a záznamy ...85 // Preparativní papírová chromatografie (Ž. Procházka) ...86 // Kvantitativní papírová chromatografio (Ž. Procházka) ...86 // Papírová chromatografie organických kyslíkatých látek (Ž. Procházka) 88 // Alkoholy ...89 // Cukry ...91 // Aldehydy a ketony ...95 // Kyseliny ...96 // Fenoly, flavonoidy, kumariny ...99 // Steroidy a terpeny ...101 // Jiné kyslíkaté látky ...103 // Papírová chromatografie organických dusíkatých látek (Ž. Procházka) 103 // Aminokyseliny a peptidy (V. Tomášek) ...103 // Složky nukleových kyselin (K. Šebesta) ...108 // Alkaloidy ...109 // Indoly ...112 // Aminy ...113 // Nitrosloučeniny ...114 // Papírová chromatografie látek obsahujících jiné heteroatomy (Ž. Procházka) ...114 // Sirné látky ...114 // Organické sloučeniny fosforu ...116 // Vitamíny (Ž. Procházka) ...116 // Antibiotika (Ž. Procházka) ...117 // Jiné organické látky (Ž. Procházka) ...119 // Papírová chromatografie anorganických látek (M. Hejtmánek) ...120 // Příklady dělení a detekce kationtů ...121 // Příklady dělení a detekce aniontů ...122 // Literatura ...124 // Kap. 4 ADSORPČNÍ A ROZDĚLOVACÍ KOLONOVÁ CHROMATOGRAFIE 128 - O. Motl a L. Novotný // 4.1 Úvod ...128 // 4.2 Adsorpční kolonová chromatografie (LSC) ...129 // 4.2.1 Adsorbenty a jejich obecné vlastnosti ...129 // 4.2.1.1 Silikagel ...134 // 4.2.1.2 Kysličník hlinitý ...139 // 4.2.1.3 Kremičitan horečnatý, Florisil ...142 //
4.2.1.4 Kysličník hořečnatý ...142 // 4.2.1.5 Hydroxylapatit ...143 // Uhlí ...143 // Polyamidy ...144 // Polystyrénové adsorbenty ...147 // Mobilní fáze ...148 // Technika klasické chromatografie (LSC) ...152 // Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) ...166 // Rozdélovaeí kolonová chromatografie (LLC) ...Igy // Stacionární fáze ...Igy // Mobilní fáze ...1 gg // Technika chromatografie kapalina-kapalina (LLC) // Příklady kolonové adsorpční chromatografie organických látek // Dělení seskviterpenických látek petroletherového extraktu oddenků // Senecio nemorensis, subsp. fuchsii ...171 // Extrakce a chromatografické dělení látek v inertní atmosféře ...172 // Argentační chromatografie na iontově výměnné koloně v cyklu Ag+ 174 // Dělení glykosidů karotenoidů na kysličníku horečnatém ...177 // Dělení korinoidů eluční chromatografií na nepolárním adsorbentu Amberlite XAD-2 ...180 // Vysokotlaká chromatografie kapalina-pevná látka na klasických a pelikulárních sorbentech ...180 // Preparativní tlaková chromatografie ...183 // Vysokotlaká chromatografie kapalina-kapalina ...185 // Literatura ...189 // Kap. 5 IONTOVĚ VÝMĚNNÁ CHROMATOGRAFIE ...192 - O. Mikeš, J. Starnberg, M. Hejtmánek a K. Šebesta // Úvod (O. Mikeš) ...192 // Podstata měničů iontů ...192 // Rozdělení měničů iontů podle jejich původu a podle chemického složení // matrice ...192 // Rozdělení měničů iontů podle ionogenních skupin ...193 // Rozdělení měničů iontů podle tvaru a skupenství ...196 // Struktura měničů iontů (J. Štamberg) ...196 // Anorganické ionexy ...196 // lonexové pryskyřice ...199 // lonexové celulosy ...202 // lonexové deriváty polydextranu a aragosy ...202 // Jiné typy ionexových materiálů ...203 // Fyzikální struktura zrnitých ionexů ...203 //
Povaha sorpéních pochodů (J. Štamberg) ...205 // Výměna iontů ...205 // Pochody doprovázející výměnu iontů ...207 // Sorpce obojetných iontů (O. Mikeš) ...207 // Podstata iontově výměnné chromatografie (J. Štamberg) ...208 // Chromatografie nízkomolekulárních látek ...208 // Chromatografie bílkovin (O. Mikeš) ...210 // Základní charakterizace měničů iontů (J. Štamberg) ...211 // Kapacita ...211 // Titrační křivky ...212 // Hustota a botnavost ...212 // Velikost a tvar zrn ...214 // Příprava měničů iontů, jejich regenerace a skladování (O. Mikeš) ...214 // Výběr vhodného měniče ...215 // Dekantace a botnání ...229 // Možnosti laboratorní frakcionace zrn podle velikosti ...229 // 5.6.4 Cyklování ...230 // 5.6.5 Výběr pufru a pufrování ionexů ...231 // 5.6.6 Regenerace a skladování ...232 // 5.7 Vlastní chromatografie (O. Mikeš) ...234 // 5.7.1 Chromatograflcké kolony a jejich kapacita ...234 // 5.7.2 Plnění kolon a kontrola ekvilibrace ...235 // 5.7.3 Nanášení vzorku ...237 // 5.7.4 Způsoby eluce a její rychlost ...237 // 5.7.5 Velikost a kontrola složení frakcí ...240 // 5.7.6 Přepočet parametrů při použití různých kolon ...241 // 5.8 Příklady použití měničů iontů k dělení směsí anorganických látek (M. Hejtmánek) ...241 // 5.8.1 Nechromatografická aplikace ...241 // 5.8.2 Chromatografie kationtů ...244 // 5.8.3 Chromatografie aniontů ...246 // 5.8.4 Výměna iontů z roztoků komplexních solí a směsných rozpouštědel . 247 // 5.9 Příklady dělení organických látek (J. Štamberg) ...250 // 5.9.1 Chromatografie na silně disociovaných ionexech ...251 // 5.9.2 Chromatografie na ionexech s modifikovanou strukturou ...256 // 5.9.3 Chromatografie na polymerních sorbentech ...260 //
5.10 Příklady použití měničů iontů v biochemii (O. Mikeš a K. Šebesta) . .261 // 5.10.1 Aminokyseliny ...262 // 5.10.2 Peptidy ...268 // 5.10.3 Bílkoviny ...271 // 5.10.4 Fragmenty mikrobiálních buněčných stěn ...277 // 5.10.6 Antibiotika ...277 // 5.10.6 Vitamíny ...280 // 5.10.7 Báze, nukleosidy, nukleotidy a nukleové kyseliny ...282 // Literatura ...287 // Kap. 6 GELOVÁ CHROMATOGRAFIE - V. Tomášek ...294 // Úvod // Princip gelové chromatografie // Definice a základní veličiny // Gely pro chromatografii // Požadavky na gely // Dextranové gely // Polyakrylamidové gely // Hydroxyalkylmethakrylátové gely // Agarosové gely // Jiné gely // Experimentální technika gelové chromatografie // Zařízení, kolony, spoje a regulace toku // Volba gelu // Přípravné práce // Velikost kolon, množství vzorku a rychlost toku // Aplikace vzorku // Vzestupné uspořádání gelové chromatografie // Regenerace náplně // Přechovávání gelů // Ochrana proti mikrobiální infekci // Zvýšení efektivní výšky kolon // Spojování kolon // Recirkulační chromatografie // Diskontinuální reeirkulační chromatografie // Zpracování experimentálních výsledků // Aplikace gelové chromatografie // Odsolování a skupinové dělení // Frakcionace směsí // Stanovení relativní molekulové hmotnosti // Literatura // Kap. 7 AFINITNÍ CHROMATOGRAFIE ...337 J. Turková // Úvod ...337 // Volba pevného nosiče ...339 // Volba afinantu a jeho vazba ...340 // Podmínky pro sorpci a eluci izolovaných látek ...343 // Pevné nosiče pro afinitní chromatografii ...343 // Agarosové nosiče a jejich deriváty ...343 // Přehled derivátů a jejich charakterizace ...343 // Chemický průběh vazby afinantu na nosič ...344 // Stabilita agarosových gelů a zacházení s nimi ...345 // Předpisy na provedení vazby afinantu na agarosu ...346 //
Vazba afinantu na Sepharosu aktivovanou bromkyanem ...346 // Triazinové metody vazby afinantu na agarosu ...346 // Modifikované deriváty agarosy ...347 // Příprava co-aminoalkylderivátu agarosy ...347 // Vazba afinantu s volnou karboxylovou skupinou na aminoethylagarosu 348 // Polyakrylamidové a hydroxyalkylmethakrylátové gely ...349 // Přehled polyakrylamidových derivátů a jejich charakterizace ...349 // Principy přípravy derivátů akrylamidových gelů a jejich vazby s afinantem ...350 // Stabilita polyakrylamidových gelů a jejich derivátů ...353 // Hydroxyalkylmethakrylátové gely ...353 // Celulosa a její deriváty ...354 // Chemický průběh vazby afinantů ...356 // Jiné nosiče ...357 // Komerčně vyráběné afinanty vázané na pevný nosič ...359 // Příklady aplikací ...361 // Afinitní chromatografie na derivátech agarosy ...361 // Izolace kuřecího ovoinhibitoru na Sepharose s vázaným chymotrypsinem 361 // Izolace chymotrypsinu afinitní chromatografii na Sepharose s kovalentně vázaným methylesterem í-ammokaproyl-n-tryptofanu ...362 // Další příklady použití agarosy a jejích derivátů ...363 // Afinitní chromatografie buněk na Bio-Gelu P6 s vázaným haptenem . 363 // Afinitní chromatografie na derivátech celulosy ...365 // Čištění protilátek pomocí imunoadsorbentů připravených za použití // bromacetylcelulosy ...365 // Přehled použití celulosových derivátů ...366 // Literatura ...367 // Kap. 8 AUTOMATIZACE A MECHANIZACE KOLONOVÝCH OPERACÍ V KAPALINOVÉ CHROMATOGRAFII ...370 - B. Meloun // 8.1 Úvod ...370 // 8.2 Zásobníky mobilní fáze a hydraulické spoje ...371 // 8.3 Ventily a čerpadla ...372 // 8.3.1 Ventily ...372 // 9 8.3.2 Čerpadla ...374 // 8.4 Gradientová a programovací zařízení ...377 // 8.4.1 Gradientová zařízení ...377 // 8.4.2 Komplexní programování ...386 //
8.6 Dávkovače vzorků a chromatografieké kolony ...385 // 8.5.1 Dávkovače vzorků ...385 // 8.5.2 ТУРУ moderních chromatografických kolon ...388 // 8.5.3 Plnění chromatografických kolon ...389 // 8.6 Detektory ...390 // 8.7 Zaznamenávání a výpočet získaných hodnot ...395 // 8.8 Průtokoměry a jímače frakcí ...399 // 8.9 Komplikovanější soustavy a příklady komplexní automatizace . . .401 // 8.10 Seznam a adresy citovaných firem ...403 // Literatura ...404 // Kap. 9 CHROMATOGRAFIE NA TENKÉ VRSTVĚ ...406 - O. Motl a L. Novotný // Úvod // Zařízení pro tenkovrstvou chromátografii // Podložky, nanášecí zařízení, příprava vrstev // Komory pro vyvíjení, stříkací box // Pevné fáze pro tenkovrstvou chromatografii // Silikagel // Kysličník hlinitý // Kremičitan horečnatý // Polyamidy // Celulosa // Měniče iontů // Materiály pro gelovou chromatografii // Ostatní sorbenty // Rozpouštědla užívaná při tenkovrstvé chromatografii // Provádění tenkovrstvé chromatografie // Nanášení vzorků // Volba mobilní fáze a způsoby vyvíjení // Detekce // Kvantitativní vyhodnocování // Preparativní tenkovrstvá chromatografie // Příprava vrstev // Nanášení vzorku // Vyvíjení chromatogramů // Detekce // Izolace látek z vrstvy // Přednosti preparativní TLC // Suchá sloupcová chromatografie // Úprava podmínek pro sloupcovou chromatografii // Příklady použití chromatografie na tenkých vrstvách // Dělení olefinů na silikagelu impregnovaném solemi Ag+ // Dělení a kvantitativní analýza triglyceridů palmového oleje // Jednorozměrné rozdělení šestnácti aminokyselin na iontově výměnné fólii // Stanovení relativní molekulové hmotnosti pomocí gelové chromatografie ...443 // Dělení tetracyklinových antibiotik ...445 // Dělení gestagenních steroidů ...445 //
Dělení anorganických aniontů na kysličníku hlinitém ...446 // Nedestrukční detekce isoprenoidních chinonů tenkovrstvou chromatografií na obrácených fázích ...447 // Dělení monosacharidů a oligosacharidů na tenkých vrstvách celulosy 447 // Dělení penicilinů velmi blízké struktury rozdělovací chromatograflí na tenké vrstvě ...448 // Kvantitativní mikroanalýza tokoferolů ...449 // Dělení vincaleucoblastinu, leucocristinu, leurosinu a leurosidinu chromát ografií na tenké vrstvě ...449 // Seznam nejběžnějších detekčních činidel pro papírovou chromatograflí a chromatografii v tenké vrstvě ...450 // Seznam dodavatelů chromatografických potřeb ...457 // Literatura ...458 // Kap. 10 PLYNOVÁ CHROMATOGRAFIE ...461 - R. Komers, M. Krejčí // Seznam symbolů ...461 // Úvod ...463 // Objevení plynové chromatografie ...463 // Základy teorie plynové chromatografie ...463 // Aparatura ...472 // Nosný plyn ...i ...474 // Dávkování ...475 // Chromatografická kolona ...476 // Termostat ...477 // Detektory ...477 // Chromatografický záznam ...485 // Přípravné práce ...485 // Stacionární fáze ...485 // Nosiče stacionární fáze ...491 // Příprava kolony ...494 // Smáčení kapilárních kolon ...494 // Úprava vzorku ...497 // Kvalitativní analýza ...498 // Identifikace složek z retenčních charakteristik ...498 // Relativní retence a retenční indexy ...503 // Selektivní detektory ...506 // Přímé spojení plynové chromatografie s hmotnostní spektrometrií // a jinými spektrálními metodami ...512 // Kvantitativní analýza ...514 // Možné zdroje chyb ...514 // Vyhodnocování chromatografických křivek ...515 // Vyhodnocování neúplně rozdělených píků ...516 // Pracovní techniky kvantitativní analýzy ...517 // Programovaná teplota ...520 // Důvody použití ...520 //
Technika a použití ...521 // Jiné způsoby použití plynové chromatografie ...522 // Měření sorpčních izoterm ...522 // Měření sorpčního tepla ...523 // Měření povrchu adsorbentů ...524 // Pyrolýzní plynová chromatografie ...526 // Stopová analýza plynovou chromatografii ...529 // Příklady použití ...533 // Analýza plynů a některých látek významných v životním prostředí 533 // Analýza organických a biochemicky významných látek ...537 // Literatura ...545 // 11 Кар. 11 ROZTŘEPÁVÁNÍ - Ž. Procházka ...647 // Úvod // Extrakce z kapaliny do kapaliny // Základy roztřepávání // Rozdělovací konstanta // Protiproudné diskontinuální roztřepávání (craigování, Craigova metoda) // Základní (Craigův) postup // Parametry roztřepávání // Aparatury // Varianty roztřepávacího postupu // Kruhový proces // Metoda jednostranného odběru // Metoda úplného odběru // Metoda oboustranného odběru // 0’Keefova metoda // Metoda Watanabova-Morikawova // Faktory ovlivňující roztřepávání // Analytické použití roztřepávání // Preparativní využití // Kontinuální metody // Příklady roztřepávání // Obohacení složité reakční směsi jednou komponentou v aparatuře // o 20 členech // Izolace čistého [2-0-methyltyTosin]oxytocinu (Methyloxytocinu SPORA) pomocí plně automatického přístroje na roztřepávání // Literatura // Kap. 12 ELEKTROMIGRAČNÍ METODY ...572 . Z. Prusík // 12.1 Úvod ...572 // 12.2 Elektroforéza ...575 // 12.2.1 Teorie pohybu iontů při zónové elektroforéze a elektroforéze s pohyblivým rozhraním ...575 // 12.2.2 Kontinuální beznosičová průtoková zónová elektroforéza ...577 // 12.2.3 Zónová elektroforéza na papíru ...579 // 12.2.4 Zónová elektroforéza na membráně z acetátu celulosy ...584 //
12.2.5 Elektroforéza na tenké vrstvě ...587 // 12.2.6 Elektroforéza v gelech ...588 // 12.2.7 Elektroforéza polyakrylamidového gelu s gradientem hustoty ...590 // 12.2.8 Diskontinuální elektroforéza na polyakrylamidovém gelu ...591 // 12.3 Izotachoforéza ...599 // 12.3.1 Teorie pohybu iontu při izotachoforéze ...599 // 12.3.2 Kapilární izotachoforéza ...602 // 12.3.3 Preparativní izotachoforéza ...606 // 12.4 Izoelektrická frakcionace (fokusace) ...607 // 12.4.1 Teorie izoelektrické frakcionace ...607 // 12.4.2 Izoelektrická fokusace v kapalném prostředí ...609 // 12.4.3 Izoelektrická fokusace v polyakrylamidovém gelu ...611 // 12.5 Elektrické’zdroje ...612 // 12.6 Zásady bezpečné obsluhy elektroforetických zařízení ...613 // 12.7 Příklady použití elektroforézy ...616 // 12.7.1 Zónová elektroforéza anorganických iontů v ligandových pufrech . . 616 // 12.7.2 Elektroforéza aminokyselin a peptidu ...619 // 12.7.3 Elektroforéza bílkovin ...626 // 12.7.4 Elektroforéza nukleových kyselin a jejich fragmentů ...636 // Dvojrozměrná separace nukleotidů ...637 // Literatura ...639 // Kap. 13 PŘEHLED LITERATURY ...642 - O. Mikeš // 13.1 Úvod ...642 // 13.2 Časopisy a jiná periodika ...643 // 13.3 Monografie ...643 // A. Chromatografie ...643 // B. Papírová a rozdělovací chromatografie ...646 // C. Kapalinová chromatografie ...647 // D. Adsorpční chromatografie ...648 // E. Iontově výměnná chromatografie ...648 // F. Gelová chromatografie ...650 // G. Afinitní chromatografie ...650 // H. Chromatografie na tenké vrstvě ...651 // 1. Plynová chromatografie ...652 // J. Extrakční chromatografie a roztřepávání ...655 // K. Elektroforéza ...655